amples for immunoassays and electrophoresis

论文:一种多孔样品均质器- 用于免疫测定和电泳样品的快速准备

作者:艾伦-德维尔

对小生物体的群体遗传学研究,如:对昆虫的研究,是依靠电泳技术和免疫测定来进行的,需要对很多有代表性个体进行分析。使用多种均质器,如:装有玻璃杆的聚丙烯微量离心管,对用于电泳分析的昆虫样品进行均质化处理。然而,对单个昆虫的均质化,随后要用微量调节注射器对其进行胶体填充,这在化验程序中是一项劳动密集型、耗时的工作。

当推出了一项免疫测定,对蚜虫抵抗杀虫剂的酶活性进行量化,这样样品制备的局限性就更加明显了,因此设计出了一种适用于标准免疫盘的多孔均质器,可以同时对96个用于免疫测定和电泳分析的单个样品进行均质化。

该均质器有一个10毫米厚的塑胶支承板,和免疫盘同样大小,每隔9毫米的距离插入一个塑胶棒,共96个塑胶棒,正好和免疫盘的96个孔相对应,棒的顶部是磨平的,孔也是平底的,从而能够相吻合。将样品装入免疫盘孔中的缓冲器里,插入均质器并手工旋转,对样品进行均质化处理。最好是使用直径4毫米的塑胶棒,这样可以有效的进行均质化处理,同时装配时孔中也留有了一个合适的量 (200 µl)。

均质化中丢失的量,对其进行量化可以通过在免疫盘单独的八孔柱中放置一系列的量(10-200µl 的PBS/Tween,以及蔗糖和溴甲酚紫)来进行,只要将均质器小心的拔出,在插入、旋转并移走均质器棒之后,所有的八孔和多管中可以重新获得的量只有5µl,不考虑均质化的量。

因此,当均质化是10 µl 和50 µl时,一定可以相应地重新获得样品的50%和90%,这涵盖了通常在小生物体电泳分析中所有使用的量。如果使用一个八通道的多管,将样品直接从免疫盘中装入放有电泳凝胶的孔中,需要在孔中每隔4.5或9毫米的具体装有梳子。

用于此目的的梳子间隔为4.5毫米(目前Burkard Scientific公司可提供);两次用八通道管子的七个顶端注满轮流的孔,这种梳子可以从一个免疫盘的两排,将14个样品装入葡聚糖凝胶GE-2/4设备的每个凝胶上,这样一来,在一个电泳槽上,一次可以同时分析56个样品。

尽管管的顶部太大,不能够伸进装有厚度为1.5毫米凝胶的孔中,使用多管同样可以将样品成功的装入用Hoeffer设备(有15个孔的梳子,No. SE 511-15,间隔9.1毫米)注入凝胶的孔中。粉虱(50µg)和家蝇(20mg)这些昆虫都均质化成功,尽管通过对抗杀虫剂的酶进行免疫测定,只针对蚜虫(ca. 400µg)进行了效率定量分析。

使用多孔均质器从单个蚜虫中提取的平均酶活性,比微量离心管中准备的大很多(P < 0.001),变量更少(P < 0.001)。不但进行的均质化更有效,而且样品制备的时间是在微量离心管中进行单个均质化时间的约十分之一。

此系统其它节省时间的方面包括:更简便的为免疫盘的浅孔和数量有限的孔记录试样载荷数据,存贮冷藏盘上堆放的样品,以及使用多管处理所有的液体。微孔反应板使用离心管,可以在分析进行之前将动植物组织的碎片清除。

随着在测量和诊断研究中越来越多地使用免疫学化验,在培养板上适量(10-200&micro;l)动植物组织的生物和医疗应用中,应该使用这种快速样品制备的技术。只要有相应的梳子,这种技术能够很好的应用于电泳研究。假定梳子上孔的间距没有限制,制造者则应该考虑使用标准间距,即4.5-9毫米,这样多管就能够更广泛的应用于样品制备和装填中。